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Gibco胎牛血清使用中的常見問題
点击次数:291 发布时间:2019-04-23
   Gibco胎牛血清使用中的常見問題
  1、 如何储存和解冻Gibco胎牛血清才不會使産品質量受損?
  將血清從冷凍箱取出後,先置于2~8℃冰箱使之融解,然後在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。
  長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沈澱或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,並避免反複凍融。
  我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
  2、血清中包含絮狀沈澱,它們是什麽,怎麽處理?
  沈澱包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響産品性質。要除去沈澱,離心血清(400g,1-2分鍾)或者簡單的讓其沈澱在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶裏(一般不建議采用過濾的方法除去沈澱,因爲沈澱會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沈澱並加熱至37℃就會再溶解。所以,使用産品時要搖動並加熱血清至37℃,沈澱會自然消失。
  3、實驗室如何選擇適合的血清?
  國內一致認爲HYCLONE的血清是zui好的,但是根據我在北美的經曆,國外一般認爲GIBCO比HYCLONE好,所以並不是價格決定質量,但是總的來說這兩種價格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細胞,國産的就夠用了。此外,由于國內HYCLONE,GIBCO並沒有生産線,我們只能從代理商那裏買,而代理商又魚龍混雜,所以買到假貨的可能性也很大。所以,我一般會從直銷員那裏買血清,有的國外生物公司由于剛剛進入中國,知名度不高,但是其實在國外已經做得很不錯了,如Wisent等,他們在國內有辦事處,我會從那裏拿,血清的品質和HYCLONE不相上下,但價格相對優惠很多。
  4、 如何避免血清中产生沉淀?
  按如下操作可避免沈澱的産生:
  (1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沈澱的發生。
  (2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
  (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
  (4) 勿将Gibco胎牛血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。
  (5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
  (6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
  5、 培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?
  一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。因爲一些抗生素和血清中的基本成分在解凍後就開始降解。
  6、 为什么要热灭活血清?
  加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
  7、 有必要做热灭活吗?
  實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因爲高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沈澱物的形成會顯著的增多,這些沈澱物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以爲是血清遭受汙染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沈澱物更增多,使研究者誤認爲是微生物的分裂擴增。
  若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間,更確保血清的質量!
  8、細胞培養中出現黑點是汙染嗎?如何處理?
  一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然後,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否遊動。如果細胞被汙染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。汙染包括細菌汙染、支原體汙染等。
  如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化,那麽,黑點的出現可能與以下幾種情況有關:
  (1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;
  (2)血清質量不好,反複凍融的結果;
  (3)配制培養基的pH值偏高,不宜細胞生長;
  (4)配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;
  (5)培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。
  9、 细胞培养中如何防止黑点生成?
  (1) 尽可能地减少血清冻融次数。
  (2) 培养基无需37℃水浴。
  (3) 培养基保持zui佳PH值7.0- 7.2。
  (4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
  (5) Gibco胎牛血清掌握細胞傳代的zui佳時機,細胞切勿生長過老。
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